Köszönjük, hogy meglátogatta a nature.com webhelyet. A használt böngésző verziója korlátozott CSS -támogatást nyújt. A legjobb eredmény elérése érdekében azt javasoljuk, hogy használjon egy újabb böngészőt (vagy a kompatibilitási mód letiltási módját az Internet Explorerben). Időközben a folyamatos támogatás biztosítása érdekében a webhelyet stílusok és javascript nélkül jelenítjük meg.
A Modic Change (MC) állati modelljeinek létrehozása fontos alapja az MC tanulmányozásához. Ötvennégy új-zélandi fehér nyulat osztottunk ál-műtéti csoportra, izomimplantációs csoportra (ME csoport) és a Nucleus pulposus implantációs csoportra (NPE csoport). Az NPE csoportban az intervertebrális korongot anterolaterális lumbális műtéti megközelítéssel fedték fel, és egy tűt használtunk az L5 gerinctestének a véglemez közelében lévő lyukasztására. Az NP -t egy fecskendővel extraháltuk az L1/2 intervertebrális korongból, és beleinjektáltuk. Egy lyuk fúrása a szubchondrális csontban. A műtéti eljárások és a fúrási módszerek az izomimplantációs csoportban és az ál-operációs csoportban megegyeztek az NP implantációs csoportjában. A ME csoportban egy darab izomot helyeztek a lyukba, míg az ál-műtéti csoportban semmit sem helyeztek a lyukba. A műtét után MRI szkennelést és molekuláris biológiai vizsgálatokat végeztünk. Az NPE csoportban a jel megváltozott, de a Sham-operation csoportban és az ME csoportban nem volt nyilvánvaló jelváltozás. A szövettani megfigyelés azt mutatta, hogy a beültetési helyen rendellenes szöveti proliferációt figyeltünk meg, és az IL-4, IL-17 és IFN-γ expressziója megnőtt az NPE csoportban. Az NP beültetése a szubchondrális csontba képezheti az MC állati modelljét.
A modikus változások (MC) a gerinces véglemezek és a szomszédos csontvelő sérülései, amelyek a mágneses rezonancia képalkotáson (MRI) láthatók. Ezek meglehetősen gyakoriak a kapcsolódó tünetekkel rendelkező egyéneknél1. Számos tanulmány hangsúlyozta az MC fontosságát, mivel az alsó hátfájással (LBP) társult a 2,3. De Roos és mtsai.4 és Modic et al. A Modic I. típusú változások hypointenzívek a T1-súlyozott (T1W) szekvenciákon és a T2-súlyozott (T2W) szekvenciákon. Ez a lézió feltárja a hasadék véglemezeit és a szomszédos érrendszeri granulációs szövetet a csontvelőben. A Modic II. Típusú változások magas jelet mutatnak mind a T1W, mind a T2W szekvenciákon. Az ilyen típusú lézióban az endlemez -megsemmisítés megtalálható, valamint a szomszédos csontvelő szövettani zsírpótlása. A Modic III. Típusú változások alacsony jelet mutatnak a T1W és a T2W szekvenciákban. Megfigyelték a szklerotikus léziókat, amelyek megfelelnek az endlapoknak6. Az MC -t a gerinc patológiás betegségének tekintik, és szorosan kapcsolódik a gerinének sok degeneratív betegségéhez7,8,9.
A rendelkezésre álló adatok figyelembevételével számos tanulmány részletes betekintést nyújtott az MC etiológiájába és kóros mechanizmusaiba. Albert et al. azt sugallta, hogy az MC -t a Disc Herniation8 okozhatja. Hu et al. Az MC -t a súlyos korong -degenerációnak tulajdonították10. A KROC javasolta a „belső lemezrepedés” fogalmát, amely kimondja, hogy az ismétlődő korong -trauma mikroteárisokhoz vezethet az endlapon. A hasadék kialakulása után a véglemez -megsemmisítés a Pulposus (NP) által végzett véglemez -megsemmisítés autoimmun választ válthat ki, ami tovább vezet az MC11 fejlődéséhez. Ma et al. Hasonló nézetet osztott meg, és arról számolt be, hogy az NP által kiváltott autoimmunitás kulcsszerepet játszik az MC12 patogenezisében.
Az immunrendszeri sejtek, különösen a CD4+ T helper limfociták, kritikus szerepet játszanak az autoimmunitás patogenezisében13. A nemrégiben felfedezett Th17 részhalmaz előállítja az IL-17 proinflammatorikus citokint, elősegíti a kemokin expresszióját, és stimulálja a sérült szervekben a T-sejteket az IFN-γ14 előállításához. A Th2 sejtek egyedülálló szerepet játszanak az immunválaszok patogenezisében is. Az IL-4 mint reprezentatív Th2 sejtek expressziója súlyos immunopatológiai következményekkel járhat15.
Noha számos klinikai vizsgálatot végeztek az MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 -ről Az etiológiát vagy az új kezelések, például a célzott terápia vizsgálatára szolgál. A mai napig csak néhány MC állatmodellről számoltak be, hogy megvizsgálják a mögöttes kóros mechanizmusokat.
Az Albert és MA által javasolt autoimmun elmélet alapján ez a tanulmány létrehozott egy egyszerű és reprodukálható Rabbit MC modellt, amely autotranszplantálással NP -vel a fúrt gerinces véglemez közelében. További célok az állati modellek szövettani tulajdonságainak megfigyelése és az NP specifikus mechanizmusainak értékelése az MC fejlesztésében. Ebből a célból olyan technikákat alkalmazunk, mint a molekuláris biológia, az MRI és a szövettani vizsgálatok az MC progressziójának tanulmányozására.
Két nyúl a műtét során vérzésben halt meg, és az MRI alatt az érzéstelenítés során négy nyúl halt meg. A fennmaradó 48 nyúl túlélte, és műtét után nem mutatott viselkedési vagy neurológiai tüneteket.
Az MRI azt mutatja, hogy a beágyazott szövet jelintenzitása különböző lyukakban különbözik. Az NPE csoportban az L5 gerinctest jelintenzitása fokozatosan megváltozott 12, 16 és 20 héttel a beillesztés után (a T1W szekvencia alacsony jelet mutatott, a T2W szekvencia vegyes jelet és alacsony jelet mutatott) (1C. Ábra), míg az MRI megjelenése A beágyazott alkatrészek másik két csoportjából viszonylag stabil maradt ugyanabban az időszakban (1A, B ábra).
(A) A nyúl gerincvelőének reprezentatív szekvenciális MRI -je 3 időpontban. A Sham-operation csoport képein nem találtak jelzavarokat. (B) A gerinctest jel jellemzői a ME csoportban hasonlóak a Sham-operation csoportban, és a beágyazási helyen az idő múlásával nem figyelhető meg szignifikáns jelváltozás. (C) Az NPE csoportban az alacsony jel jól látható a T1W szekvenciában, és a vegyes jel és az alacsony jel jól látható a T2W szekvenciában. A 12 hetes időszaktól a 20 hetes időszakig a T2W szekvencia alacsony jeleit körülvevő szórványos magas jelek csökkennek.
Nyilvánvaló csont hiperplázia látható a gerinctest beültetési helyén az NPE csoportban, és a csont hiperplázia 12-20 hétig gyorsabban fordul elő (2C. Ábra) az NPE csoporthoz képest, a modellezett gerincműben nem figyelhető meg szignifikáns változás. testek; SHAM csoport és ME csoport (2C. Ábra) 2A, B).
(A) A gerinctest felülete a beültetett résznél nagyon sima, a lyuk jól gyógyul, és a gerinctestben nincs hiperplázia. (B) A beültetett hely alakja a ME csoportban hasonló ahhoz, mint a Sham Műveleti Csoportban, és a beültetett hely megjelenésében az idő múlásával nincs nyilvánvaló változás. (C) Csont hiperplázia fordult elő az NPE csoport beültetett helyén. A csont hiperplázia gyorsan növekedett, és az intervertebrális korongon keresztül is kiterjedt a kontralaterális gerinctestbe.
A szövettani elemzés részletesebb információt nyújt a csontképződésről. A 3. ábra a H & E -vel festett posztoperatív szakaszok fényképeit mutatja. Az ál-operációs csoportban a kondrociták jól elrendeztek, és nem detektáltak sejtproliferációt (3A. Ábra). A ME csoport helyzete hasonló volt a Sham-operation csoporthoz (3B. Ábra). Az NPE csoportban azonban számos kondrocitát és az NP-szerű sejtek proliferációját figyelték meg az implantációs helyen (3C. Ábra);
(A) A trabeculák a véglemez közelében láthatók, a kondrocitákat szépen elrendezik, egyenletes sejtmérettel és alakban, és nincs proliferáció (40 -szer). (B) A beültetési hely állapota a ME csoportban hasonló a SHAM csoportéhoz. A trabeculae és a kondrociták láthatók, de a beültetési helyen nincs nyilvánvaló proliferáció (40 -szer). (B) Látható, hogy a kondrociták és az NP-szerű sejtek szignifikánsan proliferálódnak, és a kondrociták alakja és mérete egyenetlen (40-szer).
Az Interleukin 4 (IL-4) mRNS, az Interleukin 17 (IL-17) mRNS és a γ (IFN-γ) mRNS expresszióját megfigyeltük mind az NPE, mind a ME csoportokban. Amikor a célgének expressziós szintjét összehasonlítottuk, az IL-4, IL-17 és IFN-γ gén expressziója szignifikánsan megnőtt az NPE csoportban, mint az ME csoport és az ál-üzemeltetési csoport (4. ábra). (P <0,05). Az ál-üzemeltetési csoporttal összehasonlítva az IL-4, IL-17 és IFN-γ expressziós szintje az ME csoportban csak kissé növekedett, és nem érte el a statisztikai változást (p> 0,05).
Az IL-4, IL-17 és IFN-γ mRNS expressziója az NPE csoportban szignifikánsan magasabb tendenciát mutatott, mint a Sham Műveleti Csoport és az ME csoportban (P <0,05).
Ezzel szemben az ME csoport expressziós szintje nem mutatott szignifikáns különbséget (P> 0,05).
A Western blot analízist az IL-4 és IL-17 elleni kereskedelemben kapható antitestek felhasználásával végeztük a megváltozott mRNS expressziós mintázat megerősítésére. Amint az az 5a., B. ábrán látható, az ME csoporthoz és az ál-üzemeltetési csoporthoz képest az IL-4 és IL-17 fehérje szintje az NPE csoportban szignifikánsan megnőtt (p <0,05). Az ál-üzemeltetési csoporttal összehasonlítva az IL-4 és IL-17 fehérje szintje az ME csoportban szintén nem sikerült elérni a statisztikailag szignifikáns változásokat (P> 0,05).
(A) Az IL-4 és IL-17 fehérje szintje az NPE csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint az ME csoportban és a placebo csoportban (P <0,05). B) Western blot hisztogram.
A műtét során kapott korlátozott számú emberi minta miatt az MC patogenezisével kapcsolatos világos és részletes tanulmányok kissé nehézek. Megpróbáltuk létrehozni egy MC állati modellt, hogy megvizsgáljuk annak lehetséges kóros mechanizmusait. Ugyanakkor radiológiai értékelést, szövettani értékelést és molekuláris biológiai értékelést használtunk az NP Autograft által kiváltott MC folyamatának követésére. Ennek eredményeként az NP implantációs modell a jel intenzitásának fokozatos megváltozását eredményezte 12 hetes időpontokról (kevert alacsony jel a T1W szekvenciákban és az alacsony jel a T2W szekvenciákban), jelezve a szövetváltozásokat, valamint a szövettani és molekuláris és molekuláris molekuláris és molekuláris molekuláris és molekuláris molekuláris és molekuláris molekuláris szekvenciákban) A biológiai értékelések megerősítették a radiológiai vizsgálat eredményeit.
A kísérlet eredményei azt mutatják, hogy vizuális és szövettani változások történtek az NPE csoportban a gerinctest megsértésének helyén. Ugyanakkor megfigyelték az IL-4, IL-17 és IFN-γ gének expresszióját, valamint az IL-4, IL-17 és IFN-γ expresszióját, jelezve, hogy az autológ mag pulposus szövetének megsértése a gerincben A test egy sor jel- és morfológiai változásot okozhat. Könnyű rájönni, hogy az állati modell gerinctesteinek szignáljellemzői (alacsony jel a T1W szekvenciában, a vegyes jel és az alacsony jel a T2W szekvenciában) nagyon hasonló az emberi gerincejtekhez, és az MRI jellemzői is. Erősítse meg a szövettani és a bruttó anatómia megfigyeléseit, azaz a gerinc testsejtjeinek változása progresszív. Noha az akut trauma által okozott gyulladásos válasz hamarosan megjelenhet a punkció után, az MRI eredmények azt mutatták, hogy a jelváltozások fokozatosan növekvő változásai 12 héttel a punkció után jelentek meg, és akár 20 hétig is fennmaradtak, anélkül, hogy az MRI -változások helyreállítása vagy megfordítása jele lenne. Ezek az eredmények azt sugallják, hogy az autológ gerinc NP megbízható módszer a progresszív MV nyulakban történő létrehozására.
Ez a lyukasztási modell megfelelő készségre, időre és műtéti erőfeszítésekre van szükség. Az előzetes kísérletekben a paravertebrális ligamentális struktúrák boncolása vagy túlzott stimulálása gerinc osteofiták képződését eredményezheti. Vigyázni kell a szomszédos lemezek megsértésére vagy irritálására. Mivel a penetráció mélységét ellenőrizni kell a következetes és reprodukálható eredmények elérése érdekében, manuálisan készítettünk egy dugót egy 3 mm hosszú tű hüvelyének levágásával. Ennek a dugónak a használata biztosítja a gerinctest egyenletes fúrási mélységét. Az előzetes kísérletek során a műveletben részt vevő három ortopéd sebész 16-os tűket talált, hogy könnyebben dolgozzon, mint a 18-os tűvel vagy más módszerekkel. A fúrás során a túlzott vérzés elkerülése érdekében a tű egy ideig még mindig megfelelő beillesztési lyukat fog biztosítani, ami arra utal, hogy egy bizonyos fokú MC ilyen módon szabályozható.
Bár sok tanulmány az MC -t célozta meg, keveset tudunk az MC25,26,27 etiológiájáról és patogeneziséről. Korábbi tanulmányaink alapján azt találtuk, hogy az autoimmunitás kulcsszerepet játszik az MC12 előfordulásában és fejlődésében. Ez a tanulmány megvizsgálta az IL-4, IL-17 és IFN-y kvantitatív expresszióját, amelyek az antigén stimuláció után a CD4+ sejtek fő differenciálódási útjai. Vizsgálatunkban, a negatív csoporttal összehasonlítva, az NPE csoport magasabb volt az IL-4, IL-17 és IFN-γ expressziójában, és az IL-4 és IL-17 fehérje szintje szintén magasabb volt.
Klinikailag az IL-17 mRNS expressziója megemelkedik a DISK Herniation28 betegek NP-sejtjeiben. A megnövekedett IL-4 és IFN-γ expressziós szinteket egy akut, nem kompresszív korong-sérv modellben is találták, mint az egészséges kontrollok29. Az IL-17 kulcsszerepet játszik a gyulladásban, a szöveti sérülésekben az autoimmun betegségekben, és javítja az IFN-γ31 immunválaszt. Fokozott IL-17-mediált szöveti sérülésről számoltak be az MRL/LPR MICE32 és az autoimmunitás érzékeny egerekben33-ban. Az IL-4 gátolhatja a proinflammatorikus citokinek (például IL-1β és TNFα) és a makrofágok aktiválásának expresszióját34. Azt jelentették, hogy az IL-4 mRNS expressziója az NPE csoportban különbözik az IL-17-hez képest és az IFN-γ-hoz képest ugyanabban az időpontban; Az IFN-γ mRNS expressziója az NPE csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a többi csoportban. Ezért az IFN-y termelés az NP interkaláció által kiváltott gyulladásos reakció közvetítője lehet. A tanulmányok kimutatták, hogy az IFN-γ-t több sejttípus termel, beleértve az aktivált 1. típusú segítő T-sejteket, a természetes gyilkos sejteket és a makrofágokat35,36, és ez egy kulcsfontosságú gyulladáscsökkentő citokin, amely elősegíti az immunválaszokat37.
Ez a tanulmány azt sugallja, hogy az autoimmun válasz részt vehet az MC előfordulásában és fejlesztésében. Luoma et al. megállapította, hogy az MC és a kiemelkedő NP jel jellemzői hasonlóak az MRI -n, és mindkettő magas jelet mutat a T2W szekvencia38 -ban. Egyes citokinokat megerősítették, hogy szorosan kapcsolódnak az MC előfordulásához, például az IL-139-hez. Ma et al. azt sugallta, hogy az NP felfelé vagy lefelé történő kiemelkedése nagy hatással lehet az MC12 előfordulására és fejlődésére. Bobechko40 és Herzbein et al.41 arról számoltak be, hogy az NP egy immunotoleráns szövet, amely nem léphet be az érrendszeri keringésbe a születésből. Az NP kiemelkedései bevezetik az idegen testeket a vérellátásba, ezáltal közvetítve a helyi autoimmun reakciókat42. Az autoimmun reakciók nagyszámú immuntényt indukálhatnak, és ha ezeket a tényezőket folyamatosan kitéve a szöveteknek, akkor változásokat okozhatnak a jelzés43. Ebben a tanulmányban az IL-4, az IL-17 és az IFN-γ túlzott expressziója tipikus immunfaktorok, ez tovább bizonyítja az NP és az MCS44 közötti szoros kapcsolatot. Ez az állatmodell jól utánozza az NP áttörését és a véglemezbe való belépést. Ez a folyamat felfedte az autoimmunitás MC -re gyakorolt hatását.
Ahogy az várható volt, ez az állatmodell lehetséges platformot kínál nekünk az MC tanulmányozásához. Ennek a modellnek azonban továbbra is vannak korlátozásai: először is, az állati megfigyelési szakaszban néhány közbenső stádiumú nyulát eutanizálni kell a szövettani és molekuláris biológiai teszteléshez, így egyes állatok idővel „használatból esnek le”. Másodszor, bár a tanulmányban három időpontot állítanak be, sajnos csak egy típusú MC -t modelleztünk (Modic I. típusú változás), tehát nem elég az emberi betegség fejlesztési folyamatának ábrázolása, és több időpontot kell beállítani. Jobb, ha megfigyelje az összes jelváltozást. Harmadsorban, a szövetszerkezet változásait valóban egyértelműen meg lehet mutatni a szövettani festéssel, de néhány speciális technika jobban feltárhatja a modell mikroszerkezeti változásait. Például polarizált fénymikroszkópiát használtunk a fibrocartiler képződésének elemzésére a nyúl intervertebrális lemezekben45. Az NP hosszú távú hatása az MC-re és az Endplate-re további vizsgálatot igényel.
Ötvennégy férfi új-zélandi fehér nyulak (súlya körülbelül 2,5-3 kg, 3-3,5 hónapos) véletlenszerűen osztottuk álcázási csoportra, az izomimplantációs csoportra (ME csoportra) és az ideggyökér implantációs csoportra (NPE csoport). Az összes kísérleti eljárást a Tianjin Kórház etikai bizottsága hagyta jóvá, és a kísérleti módszereket szigorúan a jóváhagyott iránymutatásokkal összhangban hajtották végre.
Néhány javulást hajtottak végre az S. sobajima 46 műtéti technikájában. Mindegyik nyulat oldalsó ferde helyzetbe helyeztük, és öt egymást követő lumbális intervertebrális korong (IVD) elülső felületét poszterolaterális retroperitoneális megközelítéssel tettük ki. Mindegyik nyúl általános érzéstelenítést kapott (20% uretán, 5 ml/kg a fül vénán keresztül). A bordák alsó szélétől a medencei karimáig tartó hosszirányú bőrbetétet végeztek, 2 cm -es ventrális a paraveBrális izmokhoz. A jobb anterolaterális gerinc L1 -től L6 -ig a felülmúló szubkután szövet, a retroperitoneális szövet és az izmok éles és tompa boncolásával tette ki (6A. Ábra). A korong szintjét a medencei karimával határoztuk meg, mint anatómiai mérföldkő az L5-L6 lemez szintjén. Használjon egy 16-os gólyalábú tűt, hogy fúrjon egy lyukat az L5 csigolya véglemezének közelében 3 mm mélységre (6B. Ábra). Használjon egy 5 ml-es fecskendőt az L1-L2 intervertebrális korong autológ Nucleus pulposusának aspirálására (6C. Ábra). Távolítsa el a mag pulposust vagy izomot az egyes csoportok követelményei szerint. Miután a fúró lyuk elmélyült, az abszorbeálódó varratok a mély fasciára, a felületes fasciára és a bőrre helyezik, ügyelve arra, hogy ne károsítsák a gerinctest perioszteális szövetét a műtét során.
(A) Az L5 - L6 lemez poszterolaterális retroperitoneális megközelítéssel van kitéve. (B) Használjon egy 16-os tűt egy lyuk fúrására az L5 véglemez közelében. (C) Az autológ MF -eket betakarítják.
Az általános érzéstelenítést 20% -os 6 ml/kg uretánnal adtuk be, amelyet a fül vénán adtak be, és az ágyéki gerinc röntgenfelvételeit 12, 16 és 20 héten megismételtük a műtét után.
A nyulakat a ketamin (25,0 mg/kg) és az intravénás nátrium -pentobarbitális (1,2 g/kg) intramuszkuláris injekcióval feláldozták 12, 16 és 20 héttel a műtét után. A teljes gerincet eltávolítottuk szövettani elemzés céljából, és valódi elemzést végeztünk. A kvantitatív reverz transzkripciót (RT-qPCR) és a Western-blotot használtuk az immunfaktorok változásainak kimutatására.
Az MRI vizsgálatokat nyulakban végeztük 3,0 T klinikai mágnes (GE Medical Systems, Firenze, SC) felhasználásával, ortogonális végtag -tekercs -vevővel felszerelt. A nyulakat a fül vénáján keresztül 20% -os uretánnal (5 ml/kg) érzéstelenítettük, majd a mágnesbe fekve helyeztük el, és az ágyéki régió egy 5 hüvelykes átmérőjű kör alakú felületi tekercs (GE orvosi rendszerek) középpontjában áll. Koronális T2-súlyozott lokalizátor képeket (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) szereztünk be az ágyéki lemez L3-L4-től L5-L6-ig terjedő helyének meghatározására. A Sagittal Sík T2-súlyozott szeleteket a következő beállításokkal szereztük be: gyors spin-echo szekvencia 2200 ms ismétlési idővel (TR) és 70 ms visszhangidővel (TE), mátrix; 260 és nyolc inger vizuális mezője; A vágási vastagság 2 mm volt, a rés 0,2 mm volt.
Az utolsó fénykép elkészítése után és az utolsó nyúl megölték, az ál-, izom-beágyazott és NP tárcsákat eltávolítottuk a szövettani vizsgálat céljából. A szöveteket 10% -ban semleges pufferolt formalinban rögzítettük 1 hétig, etilén -diaminetracetsavval és paraffinnal metszett. A szöveti blokkokat paraffinba ágyaztuk, és mikrotome segítségével szagittális szakaszokba (5 μm vastag) vágtuk. A metszeteket hematoxilinnel és eozinnal (H&E) festettük.
Miután az egyes csoportok nyulaiból az intervertebrális lemezeket összegyűjtöttük, az összes RNS-t UNIQ-10 oszlop (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kína) felhasználásával extraháltuk a gyártó utasításai szerint, és egy IRMROM II fordított transzkripciós rendszer (Promega Inc. , Madison, WI, USA). Fordított transzkripciót hajtottunk végre.
Az RT-QPCR-t a PRISM 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) és a SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) alkalmazásával végeztük. A PCR reakció térfogata 20 μl volt, és 1,5 μl hígított cDNS -t és 0,2 μM -t tartalmazott az egyes primerekből. A primereket az Oligoperfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) tervezte, és a Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kína) (1. táblázat) gyártotta. A következő termikus ciklusfeltételeket alkalmaztuk: kezdeti polimeráz aktiválási lépést 94 ° C -on 2 percig, majd 40 ciklus 15 s -os, mindegyik 94 ° C -on a sablon denaturációjára, 1 percig 60 ° C -on, kiterjesztés és fluoreszcencia lágyításához. A méréseket 1 percig végeztük 72 ° C -on. Az összes mintát háromszor amplifikáltuk, és az RT-QPCR elemzéshez az átlagértéket használtuk. Az amplifikációs adatokat a FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) alkalmazásával elemeztük. Az IL-4, IL-17 és IFN-γ gén expresszióját normalizáltuk az endogén kontrollhoz (ACTB). A cél mRNS relatív expressziós szintjét kiszámítottuk a 2-ΔACT módszerrel.
Az összes fehérjét a szövetekből extraháltuk egy szöveti homogenizálóval RIPA lízispufferben (proteázt és foszfatáz -gátló koktélt tartalmazó), majd 13 000 fordulat / perc sebességgel 20 percig 4 ° C -on centrifugáltuk a szöveti hulladék eltávolítása érdekében. Ötven mikrogramm fehérjét töltünk be sávonként, 10% SDS-PAGE-vel elválasztva, majd egy PVDF membránba vittük. A blokkolást 5% -os, zsíros száraz tejben végeztük Tris-pufferolt sóoldatban (TBS), amely 0,1% Tween 20-at tartalmaz 1 órán át szobahőmérsékleten. A membránt nyúl anti-dekorin primer antitesttel (1: 200; Boster, Wuhan, Kína) inkubáltuk (1: 200; Bioss, Peking, Kína) egy éjszakán át 4 ° C-on, és a második napon reagált; Másodlagos antitesttel (kecske anti-nyúl immunoglobulin G 1: 40 000 hígításnál) a torma-peroxidázzal (Boster, Wuhan, Kína) kombinálva 1 órán át szobahőmérsékleten. A Western blot jeleket a röntgen besugárzás után a kemilumineszcens membrán fokozott kemilumineszcenciájával detektáltuk. A denzitometrikus elemzéshez a blotokat beolvastuk és számszerűsítettük a BandScan szoftver segítségével, és az eredményeket a célgén immunreaktivitásának és a tubulin immunreaktivitásának arányában fejeztük ki.
A statisztikai számításokat az SPSS16.0 szoftvercsomag (SPSS, USA) alkalmazásával végeztük. A vizsgálat során összegyűjtött adatokat átlag ± szórásként (átlag ± SD) fejeztük ki, és egyirányú ismételt varianciaanalízis (ANOVA) elemzésével elemeztük a két csoport közötti különbségek meghatározására. A P <0,05 -et statisztikailag szignifikánsnak tekintették.
Így az MC állati modelljének kialakítása az autológ NP -k beültetésével a gerinctestbe, és makroanatomikus megfigyelés, MRI elemzés, szövettani értékelés és molekuláris biológiai elemzés elvégzésével, az emberi MC mechanizmusainak értékeléséhez és megértésében, valamint az új terápiás fejlesztéshez, valamint az új terápiás kidolgozásához. beavatkozások.
Hogyan lehet idézni ezt a cikket: Han, C. et al. A modikus változások állati modelljét úgy hozták létre, hogy az autológ mag pulposus -t beültetjük az ágyéki gerinc szubchondrális csontjába. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. és Boos, N. Az ágyéki gerinc mágneses rezonancia képalkotása: a korong -sérv és a visszatartás prevalenciája, az ideggyökér -kompresszió, - arány. Radiology 209, 661–666, doi: 10.1148/radiológia.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS és Leboeuf-Eed, K. Modic változások és azok kapcsolata a klinikai eredményekkel. Európai Spine Journal: Az Európai gerinc Társaság, a gerinc deformációs Európai Társaság és a Mecenceticus Kutatási Európai Társaság hivatalos kiadványa 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et al. Modikus változások az ágyéki gerinces véglemezekben: prevalencia és az alsó hátfájás és az isiász kapcsolat a középkorú férfi munkavállalókban. Spine 32, 1116–1122, doi: 10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. és Dalinka, M. MRI a csontvelő -változások a véglemez közelében az ágyéki gerinc degeneratív betegségében. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ és Carter, JR degeneratív korongbetegség: A gerincvelő -csontvelő változásának értékelése az MRI -vel. Radiológia 166, 193–199, doi: 10.1148/radiológia.166.1.336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS és Carter, JR degeneratív korongbetegség képalkotása. Radiológia 168, 177–186, doi: 10.1148/radiológia.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. A népi populációban a neovertebrális véglemez (MODIC) jel változásainak előrejelzői. Európai Spine Journal: Az Európai gerinc Társaság, a gerinc deformációs Európai Társaság és az Európai Spinok Kutatási Európai Társaságának hivatalos közzététele, 19. osztály, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-009-184-5 (2010).
Albert, HB és Mannisch, K. Modic megváltozik az ágyéki lemez sérv után. Európai Spine Journal: Az Európai gerinc Társaság, a gerinc deformációs Európai Társaság és a Macikeri Spine Research Európai Társaságának hivatalos közzététele 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. és Kaapa, E. A Modic I. típusú változások gyorsan megjósolhatják a deformációs lemez degenerációját: egy éves prospektív tanulmány. Európai Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ és Fan, SW Modic Változások: Lehetséges okok és hozzájárulás az ágyéki degenerációhoz. Orvosi hipotézisek 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV belső lemez repedése. A lemez prolapszi problémái 50 év alatt. Spine (Phila PA 1976) 11, 650–653 (1986).
A postai idő: december-13-2024